رسالة جامعية| رسالة دكتوراه تتناول دور الحامض النووي الريبوزي فى سرطان الثدى

نوقشت مؤخرًا بكلية العلوم جامعة قناة السويس بالإسماعيلية قسم الكمياء الحيوية رسالة دكتور بعنوان دور الحامض النووي الريبوزي الطويل الغير مشفر (هوت اير ) كدلاله حيوية فى سرطان الثدى للباحثة نعمة ضاحي حسنين أحمد.

وقد تكونت لجنة المناقشة والحكم على الرسالة من الأستاذ الدكتور /زكريا عبد الحليم محمد الخياط أستاذ الكمياء الحيوية الطبية بالمركز القومي للبحوث، والأستاذ الدكتور نشوى ناجي الخزرجي أستاذ التحاليل الطبية وأمراض الدم بكلية الطب جامعة عين شمس، أستاذ دكتور هبة أحمد علي عبد الرازق أستاذ فسيولوجي كليه الطب البيطري جامعه قناة السويس.

ولجنة الإشراف تكونت من: الأستاذ الدكتور : محي الدين عبدالفتاح عبدالعاطي أستاذ الكيمياء العضوية, قسم الكيمياء , كلية العلوم جامعة قناة السويس، دكتور نشوي ناجي الخزرجي أستاذ مساعد التحاليل الطبية وأمراض الدم كلية الطب جامعة عين شمس.

وقد ذكرت الباحثة أن سرطان الثدي هو واحد من أكثر أنواع السرطان شيوعا في العالم. هو سبب رئيسي للوفاة بين الإناث. تتزايد معدلات الإصابة والوفيات على مستوى العالم بأكثر من خمسة أضعاف مما يهدد الصحة ويحمل عبئًا كبيرًا على المجتمع بسبب ارتفاع تكاليف العلاج (Jemal A; 2010) ؛ في الوقت الحاضر ، مع تطور العلاج الكيميائي والعلاج الهرموني ، والعلاج المناعي والعلاج الجيني ، فضلا عن غيرها من تكنولوجيا العلاج ، تم تحسين نتائج البقاء على قيد الحياة والمرض على المدى الطويل. ومع ذلك ، فإن حالات قليلة انتكست بسبب مقاومة الأدوية ، لذلك ، حاولت الأبحاث أن تجد مؤشرا جديدا يمكنه التنبؤ بالاستجابة للعلاج (Lianos GD; 2014).

وقد تناولت تعريف الحامض النووي الريبوزي غير المشفر الطويل (LNC) كشكل للحمض النووي الريبي التي هي > 200 قاعدة وهو غير مشفر لانتاج بروتين (Ilott NE و Ponting CP ؛ 2013) و ترتبط أنماط تعبير ال LncRNAs حسب نوع الخلية أو نوع الأنسجة أومرحلة تمايز الخلايا (Loewer S et al؛ 2010) ، وتقوم بأدوار تنظيمية جينية متنوعة ، مثل التنظيم الفوق جيني ، ومراقبة دورة الخلية ، والنسخ ، والترجمة ، وتمايز الخلايا (Hah N and Kraus WL؛ 2014). الأهم من ذلك ، يرتبط التعبير الشاذ(تغير مستوياته عن المعدل الطبيعي) من lncRNAs بتطور السرطان. لذلك قد تم اعتبار ال lncRNAs دلالات بيولوجية وأهداف علاجية محتملة (Huarte ، 2015).

الحامض النووي الريبوزي غير المشفر الطويل (HOTAIR) الذي يتعدى عملة عدة مستويات اي الذي يتطابق مع الحامض الريبوزي الرسول ويكون شكل هجين يمنع الحامض الريبوزي الرسول من انتاج البروتين وهو الذي الذي ينظم المواقع المستهدفة المختلفة بما في ذلك الجينات المثبطة للورم (Hajjari و Salavaty ، 2015). وبفضل هذه الآلية التنظيمية ، وقد أفادت الكثير من الدراسات عن دور HOTAIR في تقدم أنواع مختلفة من السرطان مثل سرطان الثدي والقولون وسرطان المعدة (Hajjari and Salavaty، 2015).. وجدت عدم انتظام هذه النسخة الطويلة في أورام الثدي (Gupta et al.، 2010). ثم أظهرت دراسات أخرى أن ارتفاع معدلات HOTAIR يرتبط مع بسوء التشخيص ، ونشأة الورم الخبيث ، وغزو الورم للأعضاء ، والبقاء على قيد الحياة لفترة قصيرة بسبب سرطان الثدي.

وكان الهدف من البحث :
1. تقييم مستويات التعبير من الحامض النووي الريبوزي الغير مشفر الطويل HOTAIR في مرضى سرطان الثدي في المراحل المبكرة مقارنة مع الأفراد الغير مصابة بسرطان الثدي.
2. ربط التعبير عن التعبير الجيني ل Lnc-HOTAIR مع الخصائص الإكلينيكية للمرضى.

3. تقييم قيمته كمؤشر حيوي وقائي للتنبؤ بالاستجابة للعلاج.
موضوعات والأساليب: ستجري الدراسة على 100 سيدة في قسم الأورام – مستشفى دمرداش – جامعة عين شمس ، وسيتم الحصول على الموافقة من جميعهن. وستتخذ لجنة الأخلاقيات المؤسسية هذه الموافقة على هذه الدراسة. جامعة عين شمس.
سيتم تصنيف مواضيع الدراسة إلى مجموعتين على النحو التالي:
¬مجموعة الأولى: تضم 70 مريضاً مصابين بسرطان الثدي الموضعي الرئيسي الذين يخضعون لعملية استئصال الثدي الجذري ولم يتلقوا العلاج الكيميائي ؛ سيتم اعتبارهم كمجموعة مدروسة. يتم تأكيد التشخيص من خلال فحص كامل للجسم باستخدام التصوير المقطعي المحوسب (CT).
¬ المجموعة الثانية: تضم 20 مريض مصاب باورام الثدي “غير الخبيثة” ، مؤكدة بالفحص المرضي الهستولوجي.
¬ مجموعة التحكم: 10 إناث عاديات من عمر متطابق إلى المجموعة المدروسة.

وقد تناول البحث

1. تاريخا مفصلا لكل مريض ، مع إشارة خاصة إلى تاريخ العائلة الحالي والماضي.
2. المرضى الكاملين سيتم جمع البيانات السريرية والمخبرية من صحائف بيانات المريض. 3. جمع العينات: سيتم جمع 3 مل من الدم الكامل عن طريق ثقب الوريد في أنبوب هلام مفرغة من الهواء. سيتم فصل العينات المجمعة بالطرد المركزي عند 4000 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق عند درجة حرارة الغرفة. سيتم تخزين عينات مصل في -80ºc ل استخراج الحمض النووي الريبي.
دراسة التعبير عن الحامض النووي الريبوزي الغير مشفر الطويل HOTAIR و الحامض النووي الريبوزي الرسول
1- وتم استخراج إجمالي mRNA و lnc-RNA من عينات مصلية ثم يتم نسخها باستخدام عناصر مخصصة للحامض النووي الريبوزي وفقًا لبروتوكول عدة الشركة المصنعة.

2-اختبار الجين التعبيري: الكمي َQPCR سوف يؤدي على للتعبير عن الجينات الحامض النووي الريبوزي الغير مشفر الطويل HOTAIR باستخدام تقنية السيبر جرين QPCR

التحليل الإحصائي: سيتم تحليل البيانات إحصائياً باستخدام الحزمة الإحصائية لبرنامج العلوم الاجتماعية (SPSS) لنظام Windows ، الإصدار 18.0 (SPSS Inc.، Chicago، IL